Alkoholdehidrogenazės pradinio fermentinės reakcijos greičio ir kinetinių parametrų nustatymas


Chemijos laboratorinis darbas.

LABORATORINIS DARBAS NR. Alkoholdehidrogenazės ADH pradinio fermentinės reakcijos greičio ir kinetinių parametrų Km ir Vmax nustatymas Darbo tikslas. Darbo eiga Pradinio fermentinės reakcijos greičio nustatymas. Pradinio fermentinės reakcijos greičio priklausomybės nuo fermento koncentracijos nustatymas. NADH koncentracijos priklausomybės nuo laiko grafikas. Įvertinamas pradinis reakcijos greitis. Nubraižomas pradinio reakcijos greičio priklausomybės. Laikas 10 µL 20 µL 40 µL 60 µL 80 µL.


NADH absorbcijos pokytis matuojamas spektrofotometru kambario temperatūroje, esant bangos ilgiui 340 nm. Į 1 mL talpos spektrofotometro kiuvetę įpilama:

• 167 μL 0,06 M natrio pirofosfatinio buferinio tirpalo, pH 8,5;

• 33 μL 0,015 M NAD+ (galutinė koncentracija kiuvetėje 0,5 mM);

Specifinis baltymo aktyvumas išreiškiamas aktyvumo vienetais vienam mg baltymo (U/mg).

Šios reakcijos pradedamos pridedant į kiuvetę anksčiau atrinktą optimalų fermento kiekį. Atliekami matavimai.

3. Nubraižomas susidariusio NADH koncentracijos priklausomybės nuo laiko grafikas, esant skirtingoms etanolio koncentracijoms ir įvertinamas pradinis reakcijos greitis. Nubraižomas pradinio reakcijos greičio priklausomybės nuo fermento koncentracijos grafikas.

Išvados: Nustatėme oksireduktazės alkoholdehidrogenazės (ADH) pradinius reakcijos greičius, esant skirtingoms substrato EtOH koncentracijoms, apskaičiavome ADH aktyvumą, bei nustatėme Km ir Vmax reikšmes. Iš gautų duomenų matome, kad didėjant substarto koncentracijai atitinkamai didėja fermentinės reakcijos greitis bei fermento aktyvumas. Maksimalus fermentinės reakcijos greitis siekia 0,0016 M/min, o Michaelio - Menten konstanta yra lygi 0,01189 mM. Taip pat iš gautų grafikų galime prieiti išvadą, kad kuo didesnė fermentinė koncentracija, tuo šviesos absorbcija yra didesnė, vadinasi, didesnis absobuojamų dalelių kiekis. Iš absorbcijos grafikų galime nustatyti absorbcijos nuo fermento koncentracijos priklausomybę, kurią vėliau lengvai įrodome atlikę skaičiavimus.

  • Chemija Laboratoriniai darbai
  • 2017 m.
  • Lietuvių
  • Kkk
  • 6 puslapiai (775 žodžiai)
  • Universitetas
  • Chemijos laboratoriniai darbai
  • Microsoft Word 102 KB
  • Alkoholdehidrogenazės pradinio fermentinės reakcijos greičio ir kinetinių parametrų nustatymas
    10 - 3 balsai (-ų)
Alkoholdehidrogenazės pradinio fermentinės reakcijos greičio ir kinetinių parametrų nustatymas. (2017 m. Balandžio 30 d.). http://www.mokslobaze.lt/alkoholdehidrogenazes-pradinio-fermentines-reakcijos-greicio-ir-kinetiniu-parametru-nustatymas.html Peržiūrėta 2017 m. Spalio 21 d. 07:57