Biopolimerų gryninimas ir analizė


Chemijos kursinis darbas. Įžanga. Tikslas. Uždaviniai. Literatūros apžvalga. Cheminė kiaušinio analizė. Kapiliarinė elektroforezė (KE). Kapiliarinė zonų elektroforezė (KZE). Jonų mainų chromatografija (JMC). Gelelektroforezė. Įranga ir priemonės. Naudoti reagentai. Naudota įranga. Metodologija. Baltymo lizocimo paruošimas, kuris vėliau bus naudojamas kaip lizocimo žaliava. Kapiliarinės elektroforezės sąlygos. Kapiliarinės gelelektroforezės sąlygos. Jonų mainų chromatografijos darbo eiga. Skaičiavimai. Rezultatai. Išvados. Literatūros sąrašas.


Norint išskirti individualius baltymus iš biologinių struktūrų (audinių, organų, ląstelių kultūrų), reikia atlikti daug veiksmų, tokių kaip: biologinės medžiagos smulkinimą, ląstelių membranų ardymą; baltymų organelių frakcionavimą (skirstymą); baltymų ekstrahavimą (jų ištirpimą); individualų baltymų išskyrimą.Visų laboratorinių darbų metu atlikome išgryninimą ir išsamią analizę baltymo lizocimo.

Pirmąjį darbą atlikome grynindami lizocimą iš vištos kiaušinio baltymo. Gryninome keičiant tirpalo pH ir jį centrifūguojant, surenkant supernatantą – kaip lizocimo žaliavą. Analizę atlikome kapiliarinės elektroforezės metodu. Gautas elektroferogramas analizavome, iš jų gavome smailių plotus ir laikus, susipažinome su netiesioginės detekcijos rėžimu. Gavome smailes, kurios parodė neoragninius katijonus, lizocimą (kurio buvo daugiausia mūsų bandinyje) ir galbūt kitus likusius baltymus.

Laboratorijoje išmokome užsipildyti kietafazės ektrakcijos šerdeles bei jonų mainų chromotografijos kolonėles. Tai taip pat vienas iš metodų baltymų mišinių frakcionavimui, pagrįstas elektrostatine (jonine) sąveika tarp baltymų ir nejudrios fazės jonizuotų grupių. Kiaušinio baltymo frakcijų ir lizocimo analizę atlikome kapiliarinės zonų elektroforezės ir kapiliarinės gel elektroforezės metodais. Kapiliarinė zonų elektroforezė dažniausiai naudojama biologiškai aktyviems junginiams nustatyti. Per pastaruosius du dešimtmečius šis būdas naudojamas tiek mažamolekuliniams, tiek polimeriniams junginiams skirstyti. Šiuos skirstymus sąlyguoja aukštos įtampos panaudojimas, kuris gali sukurti kapiliaro viduje tam tikro greičio buferinių tirpalų ir jonų elektroosmozinį ir elektroforezinį srautus. Kapiliarinė elektroforezė pasauliniu mastu, kaip metodas naudojamas vėžio valdyme, įvairių makromolekulių gryninime ir išskyrime.

Lizocimas – hidrolazių klasės fermentas, ardantis daugiausia gramteigiamųjų bakterijų polisacharidines sieneles, organizme veikia kaip nespecifinė antibakterinė užtvara. Lizocimo yra daugiaformių leukocitų ir makrofagų granulėse ir tose gyvūnų organizmo vietose, kurios susisiekia su supančia aplinka: ašarose, motinos piene, seilėse, nosiaryklės gleivinėje. Seilėse yra 5 mg/l lizocimo. Tuo paaiškinamas seilių antibakterinis veikimas. Tai viena iš priežasčių kodėl šis baltymas yra grynininamas. Šis baltymas taip pat naudojamas maisto pramonėje, pavyzdžiui sūrių gamyboje. Jis naudojamas apsaugoti sūrį nuo vėlyvojo pūtimosi. Preparate esantis lizocimas veikia, kaip natūralus biologinis konservantas.

Taigi, šio darbo metu susipažinome su pilnu procesu, kaip galime išgryninti lizocimą, kurio gavimas šiuo metu yra pagrįstas pramoniniu būdu dėl jo naudingų savybių ir plataus panaudojimo.

Turime išgryninti lizocimo baltymą iš vištos kiaušinio baltymo ir jį išanalizuoti, pasitelkiant skirtingus baltymų analizės metodus (t.y. jonų mainų chromotografiją, kapiliarinės zonų elektroforezės ir kapiliarinės gelelektroforezės metodus).

Pasiruošti lizocimo baltymo tirpalą iš vištos kiaušinio baltymo tinkamą analizei, keičiant pH ir centrifuguojant iš surinkto supernatanto.

Atlikti lizocimo baltymo analizę kapiliarinės zonų elektroforezės, gelelektroforezės metodais ir jonų mainų chromotografija.

Atlikti kietafazės ekstrakcijos šerdelės ir jonų mainų chromotografinės kolonėlės užpildymą sorbentu.

Išanalizuoti metodų gautus rezultatus, juos paaiškinti ir aptarti.

Kapiliarinė elektroforezė (KE)Tai yra grupė metodų, kurie atliekami naudojant siaurus (20-200 µm vidinio skersmens) kapiliarus tiek didelių tiek mažų molekulių efektyviam atskyrimui. „Šiuos skirstymus sąlygoja aukštos įtampos panaudojimas, kuris gali sukurti kapiliaro viduje tam tikro greičio buferinių tirpalų ir jonų elektroosmozinį ir elektroforezinį srautus. KE yra skysčių chromatografijos ir elektroforezės derinys, kuris atliekamas kapiliariniame lygmenyje (mikro- ar nano- formate).“ – A. Maruška, O. Kornyšova „Kapiliarinė elektroforezė“.

  • Chemija Kursiniai darbai
  • 2016 m.
  • Lietuvių
  • 14 puslapių (2872 žodžiai)
  • Universitetas
  • Chemijos kursiniai darbai
  • Microsoft Word 374 KB
  • Biopolimerų gryninimas ir analizė
    10 - 8 balsai (-ų)
Biopolimerų gryninimas ir analizė. (2016 m. Sausio 20 d.). http://www.mokslobaze.lt/biopolimeru-gryninimas-ir-analize.html Peržiūrėta 2016 m. Gruodžio 07 d. 16:29