Gliukozės oksidazės aktyvumo ir kinetinių konstantų nustatymas


Chemijos laboratorinis darbas.

Laboratorinis darbas Nr. Gliukozės oksidazės aktyvumo ir kinetinių konstantų nustatymas Darbo tikslas. Grafikas. Produkto koncentracijos priklausomybė nuo laiko , esant skirtingoms gliukozės koncentracijoms. Grafikas. Produkto koncentracijos priklausomybė nuo laiko , esant gliukozės koncentracijai 19 9mM. Grafikas. Produkto koncentracijos priklausomybė nuo laiko , esant gliukozės koncentracijai 95mM. Grafikas. Produkto koncentracijos priklausomybė nuo laiko , esant gliukozės koncentracijai 97mM. Grafikas. Produkto koncentracijos priklausomybė nuo laiko , esant gliukozės koncentracijai 48mM. Grafikas. Produkto koncentracijos priklausomybė nuo laiko , esant gliukozės koncentracijai. Grafikas. Reakcijos greičio priklausomybė nuo substrato koncentracijos atvirkštinėse Lineweaver Burke koordinatėse.


Spektrofotometras. GO katalizuojamoje reakcijoje (4) susidaręs vandenilio peroksidas nustatomas naudojant HRP ir o-dianizidiną, registruojant oksidacijos produkto sugerties didėjimą esant 460 nm bangos ilgiui. Produkto koncentracijos skaičiavimui naudojamas molinis sugerties koeficientas ε=11,3 mM-1cm-1.

HRP tirpalas vandenyje, koncentracija 5 mg/ml. Paruoštas tirpalas laikomas lede/šaldytuve.

Gliukozės 1 M tirpalas. Gliukozės tirpalas turi būti paruoštas iš anksto, kad įvyktų mutarotacija α gliukozės formos į β formą.

2) Buferinis tirpalas prieš matavimus termostatuojamas esant 25 °C temperatūrai.

3) Aktyvumo matavimo mišinį sudaro 20 μl o-Dianizidino tirpalo, 50 μl HRP tirpalo, 40 μlgliukozės tirpalo, buferinis tirpalas iki bendro tūrio 2 ml.

4) Aktyvumo matavimo mišinys supilamas į matavimo kiuvetę. Šio mišinio sugertis prilygimana0.

5) Įpilama 10 μl fermento GO tirpalo, registruojama sugerties didėjimas 10 min.

6) Gauta sugerties kitimo kinetinė kreivė perskaičiuojama į koncentracijos kitimo kinetinę kreivęnaudojant molinį sugerties koeficientą

7) Skaičiuojamas produkto susidarymo greitis glodinant pradinę tiesinę kinetinės kreivės dalįtiesės lygtimi.

9) Analogiškai atliekami fermentinės reakcijos greičio matavimai esant skirtingoms gliukozėskoncentracijoms.

  • Chemija Laboratoriniai darbai
  • 2017 m.
  • Lietuvių
  • Kkk
  • 7 puslapiai (712 žodžių)
  • Universitetas
  • Chemijos laboratoriniai darbai
  • Microsoft Word 39 KB
  • Gliukozės oksidazės aktyvumo ir kinetinių konstantų nustatymas
    10 - 1 balsai (-ų)
Gliukozės oksidazės aktyvumo ir kinetinių konstantų nustatymas. (2017 m. Balandžio 30 d.). http://www.mokslobaze.lt/gliukozes-oksidazes-aktyvumo-ir-kinetiniu-konstantu-nustatymas.html Peržiūrėta 2017 m. Spalio 18 d. 08:56