Biopolimerų gryninimas ir analizė Laboratorinių darbų ataskaita


Įvadas. Laboratorinis darbas Nr. „Lizocimo gryninimas iš vištos kiaušinio baltymo“. Laboratorinis darbas Nr. „Lizocimo analizė kapiliarinės zonų elektroforezės „Kiaušinio baltymo frakcijų ir lizocimo analizė kapiliarinės Zonų elektroforezės metodu – II dalis“. Išvados. Literatūros sąrašas.


Lizocimas – taip pat žinomas kaip muramidazė ir N-acetilmuramidoglikanhidrolaze, tai hidrolazių klasės fermentas (EC 3.2.1.17). Šis fermentas yra viengrandinis polipeptidas, sudarytas iš 129 amino rugščių sujungtų keturiais disulfatiniais tilteliais[2] tarp 6 ir 127, 30 ir 115, 64 ir 80, 76 ir 94 pozicijų.[3] Flemingasis 1922 metais pirmasis pavartojo lizocimą terminą kaip bakteriolitiško agento, randamo įvairių gyvūnų audiniuose apibūdinimui. Jis pastebėjo lizocimo antibakterinį poveikį gydant bakterijų kultūras su nosies gleivėmis, gautomis iš peršalusių žmonių.[4] Lizocimas hidrolizuoja β-1,4 glikozidinius ryšius tarp N-acetilmuramo rūgšties ir N-acetil-D-glukozamino peptidoglikanuose ir N-acetil D-glukozamino liekanų chitodekstrinuose.[5] Lizocimo yra daugiaformių leukocitų ir makrofagų granulėse ir tose gyvūnų organizmo vietose, kurios susisiekia su supančia aplinka: ašarose, motinos piene, seilėse, nosiaryklės gleivinėje ir pan. Lizocimo molėkulinė masė Mr=14,307 g/mol,[6] izoelektrinis taškas pI=11.35[7]. Optimalus pH=6.2, tačiau lizocimo veikimo rangas svyruoja pH=6,0–9,0.[8]

Šioje ataskaitoje pateikiamas lizocimo gryninimas iš kiaušinio baltymo bei kiekybinė ir kokybinė lizocimo analizė jonų mainų bei elektroforezės metodais.

5 ml kiaušinio baltymas praskiedžiamas su 15 ml bidistiliuoto vandens.

Priderinamas pH iki 6 su 1 mol/l HCl. Tirpalas atsargiai maišomas.

Tirpalas centrifuguojamas 5000 rpm greičiu 5 min ir supernatantas nupilamas į stiklinaitę.

Tirpalas centrifuguojamas 5000 rpm 10 min. Supernatantas naudojamas kaip lizocimo žaliava.

Praskiedžiame anksčiau paruoštą lizocimo tirpalą į atskirus mėgintuvėlius po 500 μl: 5, 10, 20, 50kartų. Šie tirpalai yra tiriamieji bandiniai.

kapiliaro plovimas prieš analizę 1 bar slėgiu 2 min iš vieno mėgintuvėlio, po to 3 min iš kito mėgintuvėlio darbiniu elektrolitu. Analizė 10 min.

Sudedame HP3DCE buteliukus į kapiliarinės elektroforezės prietaisą: 1 spaudžiame UNLOAD, po to A ir į 1 ir 2 pozicijas įdedame buteliukus su bidistiliuotu vandeniu (pirmame 600 μl, antrame – 300 μl).

Į 9 ir 10 pozicijas įdedame buteliukus su darbiniu elektrolitu (po 600 μl).

Spaudžiame B ir kai karuselė pasisuka, į 13 ir 14 pozicijas įdedame buteliukus su darbiniu elektrolitu (po 500 μl).

Spaudžiame C ir į 25, 26, 27 ir 28 pozicijas įdedame buteliukus su bandiniais atitinkamai skiedimai 5, 10, 20 ir 50 kartų.

Spaudžiame D ir į 37, 38, 39 ir 40 pozicijas įdedame buteliukus su 400 μl bidistiliuoto vandens (į 39 įpilta 400 μl darbinio elektrolito). Spaudžiame START.

„Settings“ lange pažymime atitinkamą „USB Port“, parenkame „Baud Rate“ (9600) ir paspaudžiame „OPEN“. Jeigu netyčia duomenys neberenkami, įsijungiame „Settings“ langą, išjungiame „USB Port“ paspaudę „CLOSE“ ir iš naujo atidarome parinkę tinkamus nustatymus.

  • Microsoft Word 574 KB
  • 2017 m.
  • Lietuvių
  • 17 puslapių (2574 žodžiai)
  • Universitetas
  • Dovilė
  • Biopolimerų gryninimas ir analizė Laboratorinių darbų ataskaita
    10 - 3 balsai (-ų)
Biopolimerų gryninimas ir analizė Laboratorinių darbų ataskaita. (2017 m. Gegužės 03 d.). https://www.mokslobaze.lt/biopolimeru-gryninimas-ir-analize-laboratoriniu-darbu-ataskaita.html Peržiūrėta 2020 m. Balandžio 08 d. 02:59
×
24 mokytojai prisijungę laukia tavo klausimo