Mikrobiologijos ir imunologijos pagrindai: laboratoriniai darbai

„ Mikroorganizmų kiekio nustatymas “. Bakterijų kiekio skaičiavimas. Darbo priemonės. Darbo eiga. Rezultatai. Darbo eiga. „Bakterijų jautrumo antibiotikams ir kitoms medžiagoms tyrimas“. Darbo eiga. Bakterijų kiekio skaičiavimas. „ Bakteriofagų skaičiavimas “. „ Bakterijų jautrumo UV spinduliavimui tyrimas “. Bakterijų jautrumo antibiotikams ir kitoms medžiagoms tyrimas “ Darbo eiga.

Norint suskaičiuoti bakterijas kultūroje atliekama eilė dešimtkartinių skiedimų: steriliu antgaliu imama 500µl žinomo optinio tankio kultūros (Mikrokoko) ir įpilama į mėgintuvėlį su 4,5ml sterilaus fiziologinio tirpalo arba auginimo terpės (arba 1ml suspensijos ir 9ml tirpalo, kaip parodyta paveikslėlyje). Gerai išmaišoma. Taip bakterijos atsiskiedžia 10 kartų (10-1). Pakeičiame automatinės pipetės antgalį ir iš mėgintuvelio, kuriame 10x atskiedėme kultūrą imame 500µl suspensijos ir perkeliame į kitą mėgintuvėlį su 4,5ml sterilaus fiziologinio tirpalo. Taip skiedžiama ir toliau, kol pasiekiamas 10-8 skiedimas. Iš kiekvieno mėgintuvėlio paimamas žinomas tūris suspensijos (200 µl) ir užsėjama į Petri lėkšteles: kultūra užlašinama ant agarizuoto paviršiaus ir sklaidoma steriliu sklaidytuvu tol, kol lėkštelės paviršius išdžiūsta ir praranda slidumą. Sklaidytuvas sterilinamas taip: suvilgomas etanolyje ir nudeginamas spiritinės lempelės liepsnoje. Lėkštelės inkubuojamos pernakt 370C temperatūroje.

Kitą dieną nustatoma, kuris skiedimas optimalus skaičiavimui: bakterijos iš mažai atskiestos kultūros padengia visą lėkštelės paviršių (”gazonas”), iš labiau atskiestos formuoja atskiras kolonijas. Kadangi kiekviena kolonija yra išaugusi iš vienos ląstelės, žinant kolonijų skaičių galima apskaičiuoti, kiek bakterijų ląstelių buvo pradiniame mėginyje. Norint tai sužinoti reikia suskaičiuotų kolonijų skaičių padauginti iš tiek, kiek kartų buvo atskiestas sėjamas mėginys. Tikslumo dėlei skaičiuokite 2 ar 3-jų gretimų skiedimų kolonijas - gretimi skiedimai teoriškai turėtų skirtis 10 kartų. Jei yra didelė paklaida, paaiškinkite, kodėl ji susidarė.